地球-65，蜘蛛女格溫（海莉·斯坦菲爾德Hailee Steinfeld 配音）因為好友彼特之死而充滿愧疚，而父親對蜘蛛人的誤解也讓她倍感焦慮。在某次行動中，葛溫結識了來自其他宇宙的同伴米圭爾·奧哈拉和傑西卡·德魯。從他們口中得知，為了防止多元宇宙進一步崩壞，米圭爾策劃成立了由蜘蛛人中的精英組成的突擊隊。葛溫受邀加入他們，並利用時空穿梭的機會來到了地球-1610，見到久違的邁爾斯（沙梅克·摩爾Shameik Moore 配音）。此時的邁爾斯和父母關係緊張，他憧憬格溫，渴望加入突擊隊又被拒絕。隨後麥爾斯又聽到一個可怕的消息，每一個宇宙中，失去至親正是所有蜘蛛人的可悲宿命…